Detecção de Aeromonas spp. e do gene de virulência aerolisina em tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) com a técnica de mPCR / Detection of Aeromonas spp. and virulence gene aerolysin in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) using PCR technique

As infecções causadas por bactérias do gênero Aeromonas estão entre as doenças mais comuns em peixes cultivados em todo o mundo, com ocorrência de aeromoniose em todos os países que possuem cultivo de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus). O presente trabalho descreve o desenvolvimento de uma nova multiplex PCR (mPCR) para diagnóstico de Aeromonas spp. e identificação do gene aerolisina (aerA). Para padronização da mPCR foram utilizadas cepas de referência de várias espécies do gênero Aeromonas e de outros gêneros. Também foram usadas cepas de campo de A. hydrophila oriundas de cultivos de peixes pacamãs (Lophiosilurus alexandri) e Aeromonas spp. de tilápias do Nilo. Os primers foram desenhados com base na região 16S rRNA e aerA. Para verificar a melhor temperatura de anelamento foram utilizados gradientes entre 59°C a 61°C com 40ng de DNA molde. Os produtos da amplificação da região 16S rRNA e do gene aerA apresentaram 786 e 550pb, respectivamente. A mPCR apresentou melhor temperatura de anelamento a 57,6°C com limite de detecção das concentrações de DNA em ambos genes (16S rRNA and aerA) de 10-10g/μL. A mPCR padronizada é rápida, sensível e específica no diagnóstico de Aeromonas spp. e identificação do gene aerolisina. Esta metodologia apresenta vantagens quando comparada aos métodos de diagnóstico convencionais, podendo ser utilizada em cultivos comerciais de tilápias do Nilo ou outros peixes. A identificação do gene aerolisina é uma importante ferramenta na determinação do potencial patogênico dos isolados de Aeromonas spp. estudados.(AU)

Infections caused by bacteria of the genus Aeromonas are among the most common diseases in fish farming systems worldwide, and this disease occurs in all countries which have Nile tilapia (Oreochromis niloticus) farmed. The present work describes the development of a new multiplex PCR (mPCR) technique that diagnosis the genus Aeromonas and detects aerolysin gene (aerA). Reference strains of several Aeromonas species and other genera were used for standardization of mPCR. Strains of A. hydrophila from "pacaman" fish (Lophiosilurus alexandri) and Aeromonas spp. from Nile tilapia from farming systems were used too. Primers were designed based on the 16S rRNA region and aerA (aerolysin toxin). To verify a better annealing temperature were used gradients between 59°C and 61°C with 40ng of the DNA template. The 16S rRNA gene and the aerA gene amplification products showed 786 and 550 bp, respectively. The mPCR showed better annealing temperature at 57.6°C, and the detection limit for both genes (16S rRNA and aerA) was 10-10g/μL of the DNA. The standardized mPCR is quick, sensitive, and specific for Aeromonas spp. diagnosis and to detect aerolysin gene. This method showed advantages when compared to the conventional diagnostic methods and can be used in Nile tilapia or other fish farming systems. The detection of aerolysin gene is an important tool to determine the potential pathogenicity of Aeromonas spp. isolates.(AU)

Influência do polipirrol e dos níveis de salinidade na formação de biofilme em Aeromonas spp / Influence of polypyrrole and salinity levels on biofilm formation in Aeromonas spp

Bactérias do gênero Aeromonas são patógenos altamente disseminados no ambiente aquático, responsáveis por grandes perdas econômicas na piscicultura de diversos países. São micro-organismos oportunistas e sua patogenicidade está ligada a alguns fatores de virulência, como a formação de biofilme. O estresse salino é um dos fatores que favorecem a formação dessas colônias e, consequentemente, o aumento de infecções. Essas infecções quando estão associadas ao biofilme são ainda mais resistentes aos antimicrobianos. Nesse contexto, o polipirrol destaca-se como uma alternativa antimicrobiana por possuir vários atributos terapêuticos e não apresentar toxicidade aos organismos. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi avaliar o perfil de susceptibilidade e a capacidade de formação de biofilme dos isolados de Aeromonas spp. associados aos diferentes níveis de salinidade e polipirrol. Determinou-se a atividade antibacteriana dos isolados e ensaios de motilidade foram realizados com bactérias que carreavam o gene fla. Também verificou-se a capacidade do cloreto de sódio e polipirrol em interferir na formação do biofilme. Os resultados foram evidenciados com a microscopia eletrônica de varredura. As concentrações de 2 e 3% de NaCl inibiram a motilidade bacteriana. Na formação do biofilme, 83% dos isolados bacterianos induziram a produção na concentração de 0,25%. O polipirrol causou a morte de todos os isolados testados na concentração de 125μg/mL. Além disso, esse composto diminuiu a motilidade bacteriana nas concentrações de 0,25 a 3%, sendo que em relação à produção de biofilme, não houve interferência. Esses resultados evidenciam que os diferentes níveis de NaCl influenciam na formação do biofilme favorecendo a persistência da infecção. Este estudo também realçou a potencialidade do polipirrol como agente bactericida, sendo uma alternativa eficaz às drogas antimicrobianas para o tratamento das infecções causadas por Aeromonas spp.(AU)

Bacteria of the genus Aeromonas are highly disseminated pathogens in the aquatic environment, responsible for great economic losses in the pisciculture of several countries. They are opportunistic microorganisms and their pathogenicity is linked to some virulence factors, such as biofilm formation. Saline stress is one of the factors that favor the formation of these colonies and, consequently, the increase of infections. These infections, when associated with biofilm, are even more resistant to antimicrobials. In this context, polypyrrole stands out as an antimicrobial alternative because it has several therapeutic attributes and does not present toxicity to organisms. Thus, the objective of this study was to evaluate the susceptibility profile and the biofilm formation capacity of Aeromonas spp. associated with different levels of salinity and polypyrrole. The antibacterial activity of the isolates was determined and motility assays were performed with bacteria bearing the fla gene. The ability of sodium chloride and polypyrrole to interfere with biofilm formation has also been demonstrated. The results were evidenced with scanning electron microscopy. Concentrations of 2 and 3% of NaCl inhibited bacterial motility. In the biofilm formation, 83% of the bacterial isolates induced production at the concentration of 0.25%. Polypyrrole caused the death of all the isolates tested at the concentration of 125μg/mL. In addition, this compound decreased bacterial motility at concentrations of 0.25 to 3%, and no biofilm was produced. These results show that the different levels of NaCl influence in the formation of the biofilm favoring the persistence of the infection. This study also highlighted the potential of polypyrrole as a bactericidal agent, being an effective alternative to antimicrobial drugs for the treatment of infections caused by Aeromonas spp.(AU)

Atividade antimicrobiana e antibiofilme de nanopartículas de prata sobre isolados de Aeromonas spp. obtidos de organismos aquáticos / Antimicrobial and antibiofilm activity of silver nanoparticles against Aeromonas spp. isolated from aquatic organisms

O uso indiscriminado de antimicrobianos tem proporcionado a algumas bactérias patogênicas a seleção de cepas multirresistentes, situação que pode ser agravada pela formação do biofilme. Desta forma, as nanopartículas de prata (AgNPs) vêm se destacando como uma alternativa inovadora, de baixo custo e eficiente contra doenças causadas por bactérias. O objetivo deste estudo foi determinar a atividade antimicrobiana das AgNPs e a interferência na formação do biofilme de Aeromonas spp. obtidas de organismos aquáticos. As AgNPs foram sintetizadas quimicamente utilizando como agente redutor o citrato trissódico e caracterizadas por espectrofotometria ultravioleta-visível (UV-Vis). A atividade antimicrobiana foi realizada contra três isolados pelo método de microdiluição em caldo para determinar a concentração bactericida mínima (CBM) e um cultivo com CCCP, um inibidor da bomba de efluxo, foi realizado para complementar o efeito das AgNPs. A interferência no biofilme foi realizada segundo o protocolo de formação e consolidado, além da caracterização desta estrutura de resistência por microscopia eletrônica de varredura. No teste da CBM, as AgNPs não foram capazes de inativar o crescimento dos isolados, ao passo que o nitrato de prata obteve eficiência em diferentes concentrações. Na presença do inibidor de bomba de efluxo, dos isolados analisados, um passou de resistente a sensível na presença das nanopartículas. As AgNPs foram eficazes em diminuir a formação de biofilme, como também atuaram sobre o biofilme consolidado em todos os isolados testados. Estes resultados indicam o potencial das nanopartículas de prata em interferir com o biofilme de Aeromonas spp. de organismos aquáticos e seres humanos.(AU)

The indiscriminate use of antibiotics has selected some pathogenic bacteria being multidrug-resistant, a situation that can be exacerbated by biofilms formation. Thus, silver nanoparticles (AgNPs) have been highlighted as an innovative alternative, low-cost and effective against bacterial diseases. The aim of this study was to determine the antimicrobial activity of AgNPs and the interference in Aeromonas spp. biofilm formation. The strains were obtained from aquatic organisms. The AgNPs were chemically synthesized using as reducing agent trisodium citrate and characterized by ultraviolet-visible spectroscopy (UV-Vis). The antimicrobial activity was carried out against three isolates by the microdilution broth method for determining minimum bactericidal concentration (CBM) and cultivation of CCCP, an inhibitor of the efflux pump, was carried out to complement the effect of AgNPs. Interference in the biofilm formation was performed according to the protocol and consolidated, within the resistance structure characterization by scanning electron microscopy. In the test of the CBM, the AgNPs were unable to inactivate the growth of the isolates, while the silver nitrate obtained efficiency in different concentrations. In the efflux pump inhibitor presence the isolates were analyzed, one went from resistant to nanoparticles to sensitive. The AgNPs were effective in reducing of biofilm formation and acted on the consolidated biofilm in all tested isolates. These results indicate the silver nanoparticles to interfere with Aeromonas spp. biofilm from aquatic organisms and human bodies.(AU)

Gene floR e a resistência ao florfenicol em isolados de Aeromonas spp. autóctones de organismos aquáticos / Gene floR and resistance to florfenicol in isolated Aeromonas spp. indigenous aquatic organisms

O gene floR descrito é descrito pela literatura como o responsável pela resistência ao florfenicol, que é um antimicrobiano amplamente utilizado na aquicultura. Esse gene já foi relatado em muitas espécies de bactérias, inclusive no gênero Aeromonas. Essas bactérias causam alta mortalidade na piscicultura trazendo prejuízos econômicos. É importante que haja estudos sobre esse gene e possíveis mutações que possam levar a alterações na estrutura e função da proteína. Os objetivos desse estudo foram caracterizar o gene floR em isolados de Aeromonas spp. obtidas do Vale do São Francisco e verificar se a presença desse gene está associada com a resistência ao florfenicol. Foram realizadas reações em cadeia da polimerase (PCR) para a presença do gene floR em 27 isolados de Aeromonas spp.. Amostras positivas para a presença do gene foram sequenciadas e analisadas quanto à presença de polimorfismos por meio de alinhamentos. Os diferentes haplótipos detectados foram utilizados para análises com os programas SIFT e PolyPhen para predição de alteração de função proteica. A modelagem estrutural da proteina codificada pelo gene floR foi realizada com o programa Modeller e, os modelos foram avaliados pelo Procheck, Verify3D e Whatif. A similaridade da estrutura tridimensional da proteína referência com as estruturas tridimensionais das proteínas codificadas pelos diferentes haplótipos foi comparada através do TM-align. A resistência das bactérias ao florfenicol foi avaliada através do teste de microdiluição em caldo, o qual também foi realizado na presença do carbonil cianeto m-clorofenil hidrazona para verificar o efeito da inibição da bomba de efluxo sobre tal resistência. Dos vinte e sete isolados avaliados quanto a presença do gene floR, 14 isolados foram positivos e 10 foram sequenciados, o que permitiu a identificação de três polimorfismos no gene floR, que levaram a construção de três haplótipos diferentes (TAA, TTA e CTG). As análises realizadas com os programas SIFT e PolyPhen apontaram que os haplótipos TTA e TAA provavelmente poderiam alterar a estrutura e função da proteína. As proteínas modeladas para os três haplótipos demonstraram possuir praticamente a mesma conformação estrutural entre si. Todos os isolados que apresentaram o gene foram resistentes ao florfenicol e aqueles que não apresentavam foram sensíveis. O teste na presença do Carbonil Cianeto m-Clorofenil Hidrazona foi realizado para três isolados, cada isolado representando um haplótipo, sendo possível observar a inibição do crescimento bacteriano em todas as concentrações independente do haplótipo. Os resultados obtidos nesse estudo mostram que a resistência ao flofenicol em Aeromonas spp. pode ser explicada pela presença do gene floR, e que esse gene está relacionado com uma bomba de efluxo. As mutações verificadas no gene floR, parecem não estar envolvidas com alteração de estrutura e função da proteína codificada por esse gene.(AU)

The floR gene is described in related literature as responsible for resistance to florfenicol, which is a widely used antimicrobial agent in aquaculture. This gene has been reported in many species of bacteria, including the genus Aeromonas. These bacteria cause high mortality in fish farming bringing economic losses. It is important that studies of this gene and possible mutations that can lead to changes in the structure and function of the protein. The aim of this study was to characterize the floR gene in isolates of Aeromonas spp. and check if the presence of this gene is associated with resistance to florfenicol in Aeromonas spp. obtained from the San Francisco Valley. PCR (Polymerase Chain Reaction) were also performed to verify the presence of the floR gene in 27 isolates of Aeromonas spp. Positive samples for the presence of the gene were sequenced and analyzed for the presence of polymorphisms using alignments. Different haplotypes detected were used for analysis with the SIFT and PolyPhen programs for prediction of changes in protein function. The structural modeling of protein encoded by the floR gene was performed using the Modeller software, and the models were evaluated by Procheck, Verify3D and Whatif. The similarity of the dimensional structure of reference protein with the dimensional structures of the proteins encoded by the different haplotypes was compared by TM-align. Bacterial resistance to florfenicol was assessed by the microdilution test, which was also performed in the presence of carbonyl cyanide m-chlorophenyl hydrazone to verify the effect of inhibiting the efflux pump. 14 isolates were positive for the presence of floR gene and 10 were sequenced and allowed the identification of three polymorphisms in the floR gene, which led to construction of three different haplotypes (TAA TTA and CTG). The analyzes carried out with the SIFT and PolyPhen programs showed that the TTA and TAA haplotypes could probably change the protein structure-function. Proteins modeled for the three haplotypes were found to have substantially the same structural conformation with each other. All isolates presenting the gene were resistant to florfenicol and those who did not have were sensitive. The test in the presence of carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone was conducted for three isolates, representing each single haplotype and was observed inhibition of bacterial growth at all concentrations independent of the haplotype. The results of this study show that resistance to flofenicol in Aeromonas spp. may be explained by the presence of floR gene and that this gene is associated with an efflux pump. Mutations observed in floR gene do not appear to be involved with chenges in structure and function of the protein encoded by gene.(AU)

Microbiological quality of trahira fish (Hoplias malabaricus) from Baixada Maranhense, municipality of São Bento, MA / Qualidade microbiológica de peixe traíra (Hoplias malabaricus) proveniente da Baixada Maranhense, município de São Bento, MA

Fish are considered rich sources of nutrients. Health care throughout its production chain aims to ensure quality, minimizing the risks of transmission of foodborne diseases. In order to evaluate the microbiological quality of trahira fish (H. malabaricus), 40 samples were analysed for Most Probable Number (MPN) of coliforms at 45ºC, counts of aerobic mesophilic bacteria and Staphylococcus spp., identification of E. coli, Salmonella spp. and Aeromonas spp.. Analyses were conducted according to official methods, procedures, and recommendations. Microbiological results showed coliform values at 45 °C ranging from <3 to > 1.1 × 103 MPN/g, presence of E. coli in 14 (35%) samples, counts of mesophilic aerobic bacteria from 9 × 102 to 109 CFU/g and absence of coagulase positive Staphylococcus aureus. Salmonella spp. was detected in 2 (5%) samples, which is in disagreement with the standards required by the RDC Nº 12 of January, 2001 (ANVISA) regarding Aeromonas spp. In total, 36 (90%) samples were contaminated, 7 (19.4%) by A. cavie and 29 (80.6%) by A. hidrophila. The results of this research showed unsatisfactory hygienic and sanitary conditions of fish from the municipality of São Bento (MA), exposing consumers to the risk of foodborne diseases.(AU)

Os peixes são considerados fontes ricas de nutrientes. Cuidados sanitários durante toda a sua cadeia produtiva visam garantir a qualidade, minimizando os riscos de transmissão de doenças alimentares. Com objetivo de avaliar a qualidade microbiológica de peixes traíra (H. malabaricus), foram analisadas 40 amostras quanto à determinação do Número Mais Provável (NPM) de coliformes a 45 ºC, contagem de bactérias aeróbias mesófilas e Staphylococcus spp. e identificação de E. coli; Salmonella spp. e Aeromonas spp. As análises foram processadas conforme métodos, procedimentos e recomendações oficiais. Os resultados microbiológicos mostraram valores de coliformes a 45 ºC variando de < 3 a > 1,1 × 103 NMP/g, presença de E. coli em 14 (35%) amostras, contagens de bactérias aeróbias mesófilas de 9 × 102 a 109 UFC/g e ausência de Staphylococcus aureus coagulase positivo. Detectou-se Salmonella spp. em 2 (5%) amostras, portanto, em desacordo com os padrões exigidos pela RDC Nº 12 de janeiro de 2001 (ANVISA) e para Aeromonas spp. No total, 36 (90%) amostras estavam contaminadas, sendo 7 (19,4%) por A. cavie e 29 (80,6%) por A. hidrophila. Os resultados da pesquisa demonstram que os peixes provenientes do município de São Bento (MA) apresentaram condições higiênico-sanitárias insatisfatórias, expondo os consumidores a risco de doenças veiculadas por alimentos.(AU)

Factores de Virulencia en Cepas de Aeromonas spp / Virulence Factors of Aeromonas spp

Algunas especies de Aeromonas han emergido como patógenos importantes, asociadas al desarrollo de infecciones gastrointestinales y extraintestinales. El objetivo de este estudio fue evaluar el potencial de virulencia de cepas de Aeromonas procedentes de vegetales. Se analizó los factores de virulencia: DNAsa, lecitinasa, caseinasa, gelatinasa, β-hemolisinas y hemaglutininas, en 59 cepas de A. hydrophila y 61 de A. caviae, aisladas de cilantro, perejil y lechuga, comercializados en Maracaibo. Los resultados fueron analizados mediante el estadístico χ². Los factores de virulencia estudiados fueron expresados por más del 80% de las cepas. Cuatro de los 6 factores fueron expresados en mayor proporción por las cepas de A. hydrophila, aunque la diferencia entre las especies sólo resultó significativa para la expresión de caseinasa (94,9% vs 72,1% p 0,05). Se evidenció una diferencia significativa en el número de factores de virulencia expresado por las dos especies, siendo mayor para A. hydrophila (p < 0,05). La expresión de un número elevado de factores de virulencia por las cepas de Aeromonas analizadas, permite atribuirles un potencial de patogenicidad similar al descrito en las cepas procedentes de infecciones humanas.

Some species of Aeromonas have emerged as important pathogens associated with the development of gastrointestinal and extra-intestinal infections. The objective of this study was to evaluate the potential virulence of Aeromonas strains from vegetables. Virulence factors were analyzed: DNase, lecitinasa, caseinase, gelatinase, hemolysines and hemaglutinies, in 59 strains of A. hydrophila and 61 of A. caviae, isolated from coriander, parsley and lettuce obtained in establishments in Maracaibo city. The results were analyzed through statistics χ2. The virulence factors studied were expressed for more of the 80% of the strains. Four of the 6 factors were expressed in greater proportion in Aeromonas hydrophila strains, although the difference between the species only significant in for caseinase expression (94.9% vs 72.1%, p 0.05). A significant difference was evident in the number of virulence factors expressed by the two species, being higher for A. hydrophila (p <0.05). The expression of a large number of virulence factors the analyzed Aeromonas strains, allow to attribute a potential of pathogenicity to the strain of human infections.

Aeromonas spp. isoladas no Ceará - Brasil: detecção genotípica de fatores de virulência esensibilidade a antimicrobianos in vitro

Espécies do gênero Aeromonas, encontradas com frequência em ambientes aquáticos,são importantes patógenos humanos. Este estudo teve como objetivo geral isolar cepasclínicas e ambientais de Aeromonas spp., assim como, investigar a presença de genes devirulência e avaliar a sensibilidade a antimicrobianos in vitro, bem como, o mecanismo deresistência. As amostras clínicas e ambientais foram identificadas por meio de testesbioquímicos e metodologia automatizada Vitek2® (bioMeriéux). A detecção de genes devirulência para enterotoxina citotóxica (act), hemolisina (asa1) e sistema de secreção III(ascV) foi feita por PCR simples. A sensibilidade aos antimicrobianos seguiu recomendaçõesdos documentos M7-A9 e M45-A2 do CLSI. A caracterização do mecanismo de resistênciafoi realizada mediante testes fenotípicos para detecção de ß-lactamases. Dos isolados clínicosforam identificados dezenove A. hydrophila, três A. veronii bv. sobria e uma A. caviae. As 35cepas ambientais foram identificadas como A. hydrophila (n=11), A. veronii bv. sobria(n=22), A. veronii bv. veronii (n=1) e A. caviae (n=1). Em relação aos genes de virulência dascepas clínicas, foram detectados os genes act, asa1 e ascV nas proporções 69,5; 8,6 e 34,7%,respectivamente. Enquanto nas cepas ambientais foram encontrados os percentuais de 51,4;45,7 e 54,2%, respectivamente. Observou-se resistência a piperacilina-tazobactam e aamoxicilina-clavulanato, em 3 e 15 cepas clínicas, respectivamente. Ademais, houveresistência a ceftazidima, meropenem, imipenem, ciprofloxacina e trimetoprimsulfametoxazol,com uma cepa resistente a cada antimicrobiano. Quanto às cepas ambientais,detectou-se resistência somente a piperacilina-tazobactam e amoxicilina-clavulanato em 1 e17 cepas, respectivamente...

Aeromonas spp., frequently found in aquatic environments, are important human pathogens.This study had the main objectives of isolating clinical and environmental strains ofAeromonas spp. and investigating the presence of virulence genes, antimicrobial susceptibilityin vitro and resistance mechanism. Clinical and environmental samples were identified bybiochemical tests and the automated Vitek2® (bioMeriéux) method. The virulence genescytotoxic enterotoxin (act), haemolysin (asa1) and type III secretion system (ascV) weredetected by simple PCR. The antimicrobial susceptibility was determined according to therecommendations of M7-A9 and M45-A2 do CLSI. The characterization of resistancemechanism was performed by detection of ß-lactamases phenotypic tests. From the clinicalisolates, 19 A. hydrophila, 3 A. veronii bv. sobria and 1 A. caviae were identified The 35environmental strains were identified as A. hydrophila (n= 11), A. veronii bv. sobria (n= 22),A. veronii bv. veronii (n= 1) and A. caviae (n= 1). Regarding the virulence genes of clinicalstrains, the act, asa1 and ascV genes were detected in the proportions 69.5, 8.6 and 34.7%,respectively. The respective percentages for the environmental strains were 51.4, 45.7% and54.2%. Resistance was observed to piperacillin-tazobactam and amoxicillin-clavulanate in 3and 15 clinical strains, respectively. Moreover, there was resistance to ceftazidime,meropenem, imipenem, ciprofloxacin and trimethoprim-sulfamethoxazole, with one strainresistant to each antimicrobial agent. As for the environmental strains, resistance was detectedonly to piperacillin-tazobactam and amoxicillin-clavulanate and, in 1 and 17 strains,respectively...

The occurrence of Aeromonas in drinking water, tap water and the Porsuk River

The occurrence of Aeromonas spp. in the Porsuk River, public drinking water and tap water in the City of Eskisehir (Turkey) was monitored. Fresh water samples were collected from several sampling sites during a period of one year. Total 102 typical colonies of Aeromonas spp. were submitted to biochemical tests for species differentiation and of 60 isolates were confirmed by biochemical tests. Further identifications of isolates were carried out first with the VITEK system (BioMeÿrieux) and then selected isolates from different phenotypes (VITEK types) were identified using the DuPont Qualicon RiboPrinter® system. Aeromonas spp. was detected only in the samples from the Porsuk River. According to the results obtained with the VITEK system, our isolates were 13 percent Aeromonas hydrophila, 37 percent Aeromonas caviae, 35 percent Pseudomonas putida, and 15 percent Pseudomonas acidovorans. In addition Pseudomonas sp., Pseudomonas maltophila, Aeromonas salmonicida, Aeromonas hydrophila, and Aeromonas media species were determined using the RiboPrinter® system. The samples taken from the Porsuk River were found to contain very diverse Aeromonas populations that can pose a risk for the residents of the city. On the other hand, drinking water and tap water of the City are free from Aeromonas pathogens and seem to be reliable water sources for the community.

Ocorrência de Aeromonas spp. em abatedouro bovino e sensibilidade a antimicrobianos / Occurrence of Aeromonas spp. in bovine abattoir and antimicrobial sensitivity

O gênero Aeromonas compreende espécies consideradas importantes patógenos para os seres humanos, sendo as gastroenterites as infecções mais comumente atribuídas a estas bactérias. Tendo em vista sua importância como patógeno de origem alimentar, a ocorrência deAeromonas spp. foi estudada em carcaças bovinas e ambiente do abatedouro em uma indústria do Estado de São Paulo. Foram colhidas 285 amostras de 19 locais. Foi realizada a contagem direta por semeadura em meio seletivo, caracterização bioquímica das espécies após enriquecimento seletivo e teste de sensibilidade a antimicrobianos. A contagem direta permitiu a quantificação dessas bactérias em apenas 12 amostras, variando de 0,5 a 9,2 x 100 UFC/cm2, sendo cinco delas de ambiente, com populações que variaram de 1,0 x 100 a 3,0 x 100 UFC/placa. Entretanto, após o enriquecimento seletivo, Aeromonas spp. foram isoladas de 38 amostras que, somadas às amostras de ambiente não submetidas ao enriquecimento, forneceram 62 isolados para análise. A caracterização bioquímica das espécies permitiu verificar a ocorrência de 59 isolados de A. caviae, um de A. sobria, um de A. trota e um de A. schubertii. O teste com antimicrobianos revelou resistência de todos os isolados pela ampicilina e cefalotina, enquanto, para os demais antimicrobianos, esta foi variável. A resistência da totalidade dos isolados a determinados antimicrobianos indica que estes devem ser utilizados criteriosamente com a finalidade de evitar o surgimento precoce de cepas deAeromonas spp. multirresistentes. Ainda, a maior prevalência deA. caviae deve ser considerada relevante, pois trata-se de uma das espécies causadoras de gastroenterite em humanos.

The genus Aeromonas comprises important human pathogens, gastroenteritis being the most common type of infection attributed to these bacteria. Considering their importance as foodborne pathogens, the occurrence of Aeromonas spp. was studied on bovine carcasses and the environment of a slaughterhouse in São Paulo State, Brazil. A total of 285 samples were collected from 19 points. Direct counting was carried out by seeding on selective medium, with biochemical characterization of the species after selective enrichment and antimicrobial sensitivity testing. The direct count permitted bacteria quantification only in 12 samples ranging from 0.5 to 9.2 x 100 CFU/ cm2, of which 5 were from environment, ranging from 1.0 x 100 to 3.0 x 100 CFU/plate. However, after selective enrichment,Aeromonas spp. was isolated from 38 samples, which when added to the environmental samples not subjected to the enrichment provided 62 isolates for analysis. Biochemical characterization allowed for the verification of the occurrence of 59 isolates of A. caviae, 1 ofA. sobria, 1 ofA. trota and 1 ofA. schubertii. Antimicrobial testing revealed that all isolates were resistant to ampicillin and cephalotin, while the results for the other antimicrobials were variable. Resistance of all isolates to some antimicrobials indicates that these must be used carefully to avoid early development of multiresistantAeromonas spp. Also, the greatest prevalence of A. caviae must be considered relevant because it is one of the causative species of human gastroenteritis.

Occurrence of heavy metals and antibiotic resistance in bacteria from internal organs of american bullfrog (Rana catesbeiana) raised in Malaysia

A total of 40 bacteria have been successfully isolated from internal organs of the American bullfrog (Rana catesbeiana) raised in Malaysia, namely, eight isolates of Aeromonas spp., 21 of Edwardsiella spp., six of Flavobacterium spp. and five of Vibrio spp. In terms of antibiotic susceptibility testing, each isolate was tested against 21 antibiotics, resulting in 482 (57.3 percent) cases of sensitivity and 61 (7.3 percent) cases of partial sensitivity. Meanwhile, 297 (35.4 percent) bacterial isolates were registered as resistant. The multiple antibiotic resistance (MAR) index of each bacterial species indicated that bacteria from raised bullfrogs have been exposed to tested antibiotics with results ranging from 0.27 to 0.39. Additionally, high percentages of heavy metal resistance among these isolates were observed, with values ranging from 85.0 to 100.0 percent. The current results provided us information on bacterial levels of locally farmed bullfrogs exposed to copper, cadmium, chromium as well as 21 types of antibiotics.(AU)

Experimental toxicity of Aeromonas spp. In mouse’s small intestine: Ultrastructural aspects / Aspectos ultraestructurales de la toxicidad experimental producida por Aeromonas spp. En el intestino delgado de ratón / Aspectos ultra-estruturais da toxicidade experimental produzida por Aeromonas spp. No intestino delgado de rato

Ultrastructural aspects of mouse small intestinal tissue cultures infected with Aeromonas spp. strains are described. High resolution light and transmission electron microscopy were used to assess the bacterial pathogenic mechanism, the ultrastructural changes that take place during the colonization of the intestinal tract and the interaction of Aeromonas spp. with the host epithelium. After 24h of culture, chains of vesicles were seen on the outer surface of the Aeromonas’ membrane. The vesicles were also found on the enterocyte surface. After 48h of culture, lysis of the epithelial intestinal cells, mononuclear phagocytic cells, phagocytic eosinophils and phagocyted Aeromonas were observed.

Se describen aspectos ultraestructurales del tejido intestinal de ratón cultivado e infectado con Aeromonas spp. Se utilizó microscopía de luz de alta resolución y microscopía electrónica de transmisión para evaluar los mecanismos patogénicos bacterianos, los cambios ultraestructurales que ocurren durante la colonización del tracto intestinal por Aeromonas spp. y la interacción de éstas con el epitelio huésped. En los cultivos de 24h se observaron vesículas distribuidas en cadenas sobre la superficie de la membrana externa de las Aeromonas. Estas vesículas se observaron unidas a la superficie del enterocito. En los cultivos de 48h se observó lisis de la superficie epitelial del intestino, migración de células fagocíticas mononucleares y presencia en la cavidad intestinal de eosinófilos fagocíticos, algunos conteniendo Aeromonas en su interior.

Descrevem-se aspectos ultra-estruturais do tecido intestinal de rato cultivado e infectado com Aeromonas spp. Utilizaram-se microscopia de luz de alta resolução e microscopia eletrônica de transmissão para avaliar os mecanismos patogênicos bacterianos, As mudanças ultra-estruturais que ocorrem durante a colonização do tracto intestinal por Aeromonas spp. e a interação destas com o epitélio hospede. Nos cultivos de 24h se observaram vesículas distribuídas em cadeias sobre a superfície da membrana externa das Aeromonas. Estas vesículas se observaram unidas à superfície do enterócito. Nos cultivos de 48h se observou lise da superfície epitelial do intestino, migração de células fagocíticas mononucleares e presença na cavidade intestinal de eosinófilos fagocíticos, alguns contendo Aeromonas no seu interior.

Caracterização de Aeromonas spp isoladas de neonatos hospitalizados / Characterization of Aeromonas spp isolates from newborns hospitalized

Aeromonas spp é reconhecida como patogênica para o homem após o consumo de água e alimentos contaminados. Na presente investigação, foram avaliadas 2.323 amostras de swabs retais de neonatos hospitalizados no Rio de Janeiro objetivando o isolamento de Aeromonas. As amostras foram coletadas e enviadas ao Laboratório de Referência Nacional de Cólera e outras enteroinfecções bacterianas, Instituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz. Os swabs foram submetidos ao enriquecimento em água peptonada alcalina adicionada de 1 por cento de cloreto de sódio (NaCl) e água peptonada alcalina adicionada de 3 por cento de NaCl (37ºC/18-24h) e semeadas em agar seletivo para Pseudomonas aeromonas (Agar GSP). Foram isoladas 56 cepas de Aeromonas assim distribuídas: Aeromonas caviae (42,8 por cento), Aeromonas media (25 por cento), Aeromonas veronii biogrupo sobria (10,7 por cento), Aeromonas hydrophila (9 por cento), Aeromonas veronii biogrupo veronii (5,3 por cento), Aeromonas sobria (1,8 por cento), Aeromonas jandaei (1,8 por cento), Aeromonas schubertii (1,8 por cento) e Aeromonas sp (1,8 por cento). Foi observada resistência a uma ou mais drogas antimicrobianas em 26,8 por cento das cepas. Considerando a relevância de Aeromonas torna-se urgente alertar sobre sua importância para o controle de infecções hospitalares.

Aeromonas spp is recognized as pathogenic to humans after consumption of contaminated water and food. In the present investigation, 2,323 rectal swab samples from newborns hospitalized in Rio de Janeiro were evaluated with a view to isolating Aeromonas. The samples were collected and sent to the national reference laboratory for cholera and other bacterial intestinal infections, at the Oswaldo Cruz Institute of the Oswaldo Cruz Foundation. The swabs were subjected to enrichment in alkaline peptonated water with the addition of 1 percent sodium chloride (NaCl) and alkaline peptonated water plus 3 percent NaCl (37°C/18-24h) and were streaked onto agar that was selective for Pseudomonas-Aeromonas (GSP Agar). Fifty-six Aeromonas strains were isolated, distributed as follows: Aeromonas caviae (42.8 percent), Aeromonas media (25 percent), Aeromonas veronii biogroup sobria (10.7 percent), Aeromonas hydrophila (9 percent), Aeromonas veronii biogroup veronii (5.3 percent), Aeromonas sobria (1.8 percent), Aeromonas jandaei (1.8 percent), Aeromonas schubertii (1.8 percent) and Aeromonas sp (1.8 percent). Resistance to one or more antimicrobial drugs was observed in 26.8 percent of the strains. Considering the importance of Aeromonas, there is an urgent need to warn about this in relation to nosocomial infection control.

Prevalência de Aeromonas spp. em fezes diarréicas de crianças menores de 5 anos de idade na cidade de Goiânia, Goiás, no biênio 1995-1996 / The prevalence of Aeromonas spp. in the diarrheal feces of children under the age of 5 years in the city of Goiânia, Goiás in the 1995-1996 biennium

Foram analisadas 163 amostras de fezes de crianças com idade abaixo de 5 anos no período de 1995 a 1996, sendo 91 de fezes diarréicas e 72 de fezes não diarréicas. O material foi coletado em meio para transporte e submetido ao processo de enriquecimento a 4oC por 7 dias. Para o isolamento primário foi utilizado ágar amido ampicilina e incubado a 35oC por 18 a 24 horas. Foram isoladas 20 (21,9%) das seguintes espécies: Aeromonas A. caviae (7,7%), A. salmonicida salmonicida (6,6%), A. sobria (4,3%), A. hydrophila (2,2%) e Salmonicida achromogenes (1,1%). Nenhuma Aeromonas spp foi isolada dos 72 pacientes-controles. A susceptibilidade das amostras de Aeromonas spp aos antimicrobianos foi maior com a ciprofloxacina, diminuindo gradativamente com cloranfenicol, gentamicina, ampicilina e eritromicina.

From 1995 through 1996, 163 fecal specimens of children aged under 5 years were analysed, 91 being from diarrhea feces and 72 without diarrhea. The material was collected in transport medium and submitted to the enrichment procedure at 4 degrees C for 7 days. For the primary isolation starch ampicillin agar was used and incubated at 35 degrees C for 18 to 24 hours. Twenty (20.9%) from the following specimens were isolated: Aeromonas (A.) caviae (7.7%), A. salmonicida salmonicida (6.6%), A. sobria (4.3%), A. hydrophila (2.2%) and Salmonicida achromogenes (1.1%). No Aeromonas spp. was isolated from the 72 control subjects. The Aeromonas spp. susceptibility to antimicrobial was greater with ciprofloxacin, being this susceptibility gradually diminished with chloranphenicol, gentamicin, ampicillin and erythromycin.